ഹീമോഗ്ലോബിൻ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് പരീക്ഷണം

പരീക്ഷണ തത്വം

ഹീമോഗ്ലോബിൻ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് വിവിധ സാധാരണവും അസാധാരണവുമായ ഹീമോഗ്ലോബിനുകൾ കണ്ടെത്താനും സ്ഥിരീകരിക്കാനും ലക്ഷ്യമിടുന്നു.

വ്യത്യസ്ത ഹീമോഗ്ലോബിൻ തരങ്ങളുടെ വ്യത്യസ്ത ചാർജുകളും ഐസോഇലക്‌ട്രിക് പോയിൻ്റുകളും കാരണം, ഒരു നിശ്ചിത pH ബഫർ ലായനിയിൽ, ഹീമോഗ്ലോബിൻ്റെ ഐസോഇലക്‌ട്രിക് പോയിൻ്റ് ബഫർ ലായനിയുടെ pH-നേക്കാൾ കുറവായിരിക്കുമ്പോൾ, ഹീമോഗ്ലോബിൻ ഒരു നെഗറ്റീവ് ചാർജ് വഹിക്കുകയും ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് സമയത്ത് ആനോഡിലേക്ക് മാറുകയും ചെയ്യുന്നു. നേരെമറിച്ച്, പോസിറ്റീവ് ചാർജുള്ള ഹീമോഗ്ലോബിൻ കാഥോഡിലേക്ക് നീങ്ങുന്നു.

ഒരു നിശ്ചിത വോൾട്ടേജിന് കീഴിലും ഒരു പ്രത്യേക ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് സമയത്തിന് ശേഷവും, വ്യത്യസ്ത ചാർജുകളും തന്മാത്രാ ഭാരവുമുള്ള ഹീമോഗ്ലോബിനുകൾ വ്യത്യസ്ത മൈഗ്രേഷൻ ദിശകളും വേഗതയും പ്രകടിപ്പിക്കുന്നു. ഇത് വ്യതിരിക്തമായ സോണുകളെ വേർതിരിക്കാൻ അനുവദിക്കുന്നു, കൂടാതെ വിവിധ ഹീമോഗ്ലോബിനുകളുടെ അളവ് നിർണ്ണയിക്കാൻ ഈ സോണുകളിൽ തുടർന്നുള്ള കളർമെട്രിക് അല്ലെങ്കിൽ ഇലക്ട്രോഫോറെറ്റിക് സ്കാനിംഗ് വിശകലനം നടത്താം. ഏറ്റവും സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന രീതി pH 8.6 സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് മെംബ്രൻ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ആണ്.

സൈറ്റോപ്ലാസ്മിനുള്ളിൽ, ഗ്ലൈക്കോജൻ അല്ലെങ്കിൽ പോളിസാക്രറൈഡ് പദാർത്ഥങ്ങളിൽ (മ്യൂക്കോപൊളിസാക്കറൈഡുകൾ, മ്യൂക്കോപ്രോട്ടീനുകൾ, ഗ്ലൈക്കോപ്രോട്ടീനുകൾ, ഗ്ലൈക്കോളിപിഡുകൾ മുതലായവ) അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന എഥിലീൻ ഗ്ലൈക്കോൾ ഗ്രൂപ്പുകൾ (CHOH-CHOH) ആനുകാലിക ആസിഡ് ഉപയോഗിച്ച് ഓക്സിഡൈസ് ചെയ്യുകയും ആൽഡിഹൈഡ് ഗ്രൂപ്പുകളായി പരിവർത്തനം ചെയ്യുകയും ചെയ്യുന്നു. ഈ ആൽഡിഹൈഡ് ഗ്രൂപ്പുകൾ വർണ്ണരഹിതമായ പർപ്പിൾ-ചുവപ്പ് ഷിഫ് റീജൻ്റുമായി സംയോജിപ്പിച്ച്, കോശത്തിൽ പോളിസാക്രറൈഡുകൾ ഉള്ളിടത്ത് നിക്ഷേപിക്കുന്ന പർപ്പിൾ-ചുവപ്പ് ചായം ഉണ്ടാക്കുന്നു. ഈ പ്രതികരണത്തെ പീരിയോഡിക് ആസിഡ്-ഷിഫ് (PAS) സ്റ്റെയിനിംഗ് എന്ന് വിളിക്കുന്നു, മുമ്പ് ഗ്ലൈക്കോജൻ സ്റ്റെയിനിംഗ് എന്ന് വിളിച്ചിരുന്നു.

പരീക്ഷണ രീതി

മെറ്റീരിയലുകൾ:സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ്മെംബ്രേൻ, ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ഉപകരണം(DYCP-38C, വൈദ്യുതി വിതരണം DYY-6C), മികച്ച സാമ്പിൾ ലോഡിംഗ് ടൂൾ(പൈപ്പറ്റ്), സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ, കളർമെട്രിക് ക്യൂവെറ്റുകൾ, ബഫറുകൾ.

ബഫർ:

(1) pH 8.6 TEB ബഫർ: 10.29 ഗ്രാം ട്രീസ്, 0.6 ഗ്രാം ഇഡിടിഎ, 3.2 ഗ്രാം ബോറിക് ആസിഡ്, 1000 മില്ലിയിൽ വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം ചേർക്കുക.

(2) ബോറേറ്റ് ബഫർ: 6.87 ഗ്രാം ബോറാക്സും 5.56 ഗ്രാം ബോറിക് ആസിഡും തൂക്കി, 1000 മില്ലിയിൽ വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം ചേർക്കുക.

നടപടിക്രമം:

Pഹീമോഗ്ലോബിൻ പരിഹാരം

ഹെപ്പാരിൻ അല്ലെങ്കിൽ സോഡിയം സിട്രേറ്റ് അടങ്ങിയ 3 മില്ലി രക്തം ഒരു ആൻറിഓകോഗുലൻ്റായി എടുക്കുക. 2000 ആർപിഎമ്മിൽ 10 മിനിറ്റ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്ത് പ്ലാസ്മ ഉപേക്ഷിക്കുക. ചുവന്ന രക്താണുക്കൾ ഫിസിയോളജിക്കൽ സലൈൻ ഉപയോഗിച്ച് മൂന്ന് തവണ കഴുകുക (750 ആർപിഎം, ഓരോ തവണയും 5 മിനിറ്റ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ). 10 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 2200 ആർപിഎമ്മിൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്ത് സൂപ്പർനാറ്റൻ്റ് ഉപേക്ഷിക്കുക. തുല്യ അളവിൽ വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം ചേർക്കുക, തുടർന്ന് കാർബൺ ടെട്രാക്ലോറൈഡിൻ്റെ അളവ് 0.5 മടങ്ങ് ചേർക്കുക. പിന്നീടുള്ള ഉപയോഗത്തിനായി അപ്പർ എച്ച്ബി ലായനി ശേഖരിക്കാൻ 5 മിനിറ്റ് ശക്തമായി കുലുക്കുക, തുടർന്ന് 2200 ആർപിഎമ്മിൽ 10 മിനിറ്റ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക.

മെംബ്രൺ കുതിർക്കുന്നു

സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് മെംബ്രൺ 3 സെൻ്റീമീറ്റർ × 8 സെൻ്റീമീറ്റർ വലിപ്പമുള്ള സ്ട്രിപ്പുകളായി മുറിക്കുക. പൂർണ്ണമായും പൂരിതമാകുന്നതുവരെ അവയെ pH 8.6 TEB ബഫറിൽ മുക്കിവയ്ക്കുക, തുടർന്ന് ഫിൽട്ടർ പേപ്പർ ഉപയോഗിച്ച് നീക്കം ചെയ്ത് ഉണക്കുക.

സ്പോട്ടിംഗ്

ഹീമോഗ്ലോബിൻ ലായനിയുടെ 10 μl ലംബമായി സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് മെംബ്രണിലേക്ക് (പരുക്കൻ വശം), അരികിൽ നിന്ന് 1.5 സെൻ്റീമീറ്റർ അകലെ കണ്ടെത്തുന്നതിന് ഒരു പൈപ്പറ്റ് ഉപയോഗിക്കുക.

ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ്

ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ചേമ്പറിലേക്ക് ബോറേറ്റ് ബഫർ ലായനി ഒഴിക്കുക. സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് മെംബ്രൺ മുറിയുടെ കാഥോഡ് അറ്റത്ത് പുള്ളികളുള്ള വശത്ത് വയ്ക്കുക. 200 V ൽ 30 മിനിറ്റ് പ്രവർത്തിപ്പിക്കുക.

എല്യൂഷൻ

HbA, HbA2 സോണുകൾ മുറിക്കുക, അവയെ പ്രത്യേക ടെസ്റ്റ് ട്യൂബുകളിൽ വയ്ക്കുക, യഥാക്രമം 15 മില്ലി, 3 മില്ലി വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം ചേർക്കുക. ഹീമോഗ്ലോബിൻ പൂർണമായി ഇല്ലാതാക്കാൻ സൌമ്യമായി കുലുക്കുക, തുടർന്ന് ഇളക്കുക.

കളറിമെട്രി

എല്യൂഷൻ ലായനിയിൽ വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം ഉപയോഗിച്ച് ആഗിരണം പൂജ്യമാക്കുകയും 415 nm-ൽ ആഗിരണം അളക്കുകയും ചെയ്യുക.

കണക്കുകൂട്ടൽ

HbA2(%) = HbA2 ട്യൂബിൻ്റെ ആഗിരണം / (HbA ട്യൂബിൻ്റെ ആഗിരണം × 5 + HbA2 ട്യൂബിൻ്റെ ആഗിരണം) × 100%

പരീക്ഷണ ഫലങ്ങളുടെ കണക്കുകൂട്ടൽ

pH 8.6 TEB ബഫർ സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് ഇലക്ട്രോഫോറെസിസിനായുള്ള റഫറൻസ് ശ്രേണി: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%

കുറിപ്പുകൾ

ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് സമയം വളരെ നീണ്ടതായിരിക്കരുത്. ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് സമയത്ത് സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് മെംബ്രൺ ഉണങ്ങാൻ പാടില്ല. HbA, HbA2 എന്നിവ വ്യക്തമായി വേർതിരിക്കുമ്പോൾ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് നിർത്തുക. നീണ്ടുനിൽക്കുന്ന ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ബാൻഡ് ഡിഫ്യൂഷനും മങ്ങലിനും കാരണമാകും.

വളരെയധികം സാമ്പിൾ ഉപയോഗിക്കുന്നത് ഒഴിവാക്കുക. അമിതമായ ഹീമോഗ്ലോബിൻ ദ്രാവകം ബാൻഡ് ഡിറ്റാച്ച്മെൻ്റിലേക്കോ അപര്യാപ്തമായ പാടുകളിലേക്കോ നയിച്ചേക്കാം, ഇത് തെറ്റായി HbA ലെവലുകൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് കാരണമാകും.

പ്രോട്ടീനുകൾ ഉപയോഗിച്ച് സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് മെംബ്രൺ മലിനീകരണം തടയുക.

കറൻ്റ് വളരെ ഉയർന്നതായിരിക്കരുത്; അല്ലെങ്കിൽ, ഹീമോഗ്ലോബിൻ ബാൻഡുകൾ വേർപെടുത്താൻ പാടില്ല.

എല്ലായ്പ്പോഴും സാധാരണ വ്യക്തികളിൽ നിന്നുള്ള മാതൃകകളും ആവശ്യമായ അറിയപ്പെടുന്ന അസാധാരണ ഹീമോഗ്ലോബിനുകളും നിയന്ത്രണങ്ങളായി ഉൾപ്പെടുത്തുക.

ബീജിംഗ് ലിയുയി ബയോടെക്നോളജി ഹീമോഗ്ലോബിൻ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസിനായുള്ള പ്രൊഫഷണൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ടാങ്ക് നിർമ്മിക്കുന്നു.DYCP-38Cസെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് മെംബ്രൻ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ടാങ്ക്, കൂടാതെ സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് മെംബ്രൻ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ടാങ്കിന് ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് പവർ സപ്ലൈയുടെ രണ്ട് മോഡലുകൾ ലഭ്യമാണ്.DYY-2Cഒപ്പംDYY-6Cവൈദ്യുതി വിതരണം.

അതേസമയം, ബെയ്ജിംഗ് ലിയുയി ബയോടെക്നോളജി ഉപഭോക്താക്കൾക്ക് സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് മെംബ്രൺ നൽകുന്നു, കൂടാതെ സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് മെംബ്രണിൻ്റെ വലുപ്പം ഇഷ്ടാനുസൃതമാക്കാനും കഴിയും. സാമ്പിളുകൾക്കും കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾക്കും ഞങ്ങളോട് ചോദിക്കാൻ സ്വാഗതം.

Beijing Liuyi ബ്രാൻഡിന് ചൈനയിൽ 50 വർഷത്തിലേറെ ചരിത്രമുണ്ട്, കൂടാതെ കമ്പനിക്ക് ലോകമെമ്പാടും സുസ്ഥിരവും ഉയർന്ന നിലവാരമുള്ളതുമായ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ നൽകാൻ കഴിയും. വർഷങ്ങളുടെ വികസനത്തിലൂടെ, ഇത് നിങ്ങളുടെ തിരഞ്ഞെടുപ്പിന് യോഗ്യമാണ്!

ഞങ്ങൾ ഇപ്പോൾ പങ്കാളികളെ തിരയുകയാണ്, OEM ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ടാങ്കും വിതരണക്കാരും സ്വാഗതം ചെയ്യുന്നു.

ഞങ്ങളുടെ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾക്കായി നിങ്ങൾക്ക് എന്തെങ്കിലും വാങ്ങൽ പ്ലാൻ ഉണ്ടെങ്കിൽ, ഞങ്ങളെ ബന്ധപ്പെടാൻ മടിക്കരുത്. നിങ്ങൾക്ക് ഇമെയിൽ വഴി ഞങ്ങൾക്ക് സന്ദേശം അയക്കാം[ഇമെയിൽ പരിരക്ഷിതം]അല്ലെങ്കിൽ[ഇമെയിൽ പരിരക്ഷിതം], അല്ലെങ്കിൽ ദയവായി ഞങ്ങളെ +86 15810650221 എന്ന നമ്പറിൽ വിളിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ Whatsapp +86 15810650221 ചേർക്കുക, അല്ലെങ്കിൽ Wechat: 15810650221