സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് മെംബ്രൻ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ഉപയോഗിച്ച് സെറം പ്രോട്ടീൻ വേർതിരിക്കുന്നതിനുള്ള പരീക്ഷണം

തത്വം

സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് ഫിലിം ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ഒരു പിന്തുണയായി സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് ഫിലിം ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് രീതിയാണ്.വൈദ്യുത മണ്ഡലത്തിന്റെ പ്രവർത്തനത്തിൽ ചാർജ്ജ് കണങ്ങൾ എതിർ ഇലക്ട്രോഡിലേക്ക് നീങ്ങുന്ന പ്രതിഭാസത്തെ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് എന്ന് വിളിക്കുന്നു.ഓരോ പ്രോട്ടീനിനും ഒരു പ്രത്യേക ഐസോഇലക്‌ട്രിക് പോയിന്റ് ഉള്ളതിനാൽ, ഒരു പ്രോട്ടീൻ അതിന്റെ ഐസോഇലക്‌ട്രിക് പോയിന്റിനേക്കാൾ പിഎച്ച് കുറഞ്ഞ ലായനിയിൽ സ്ഥാപിച്ചാൽ, പ്രോട്ടീൻ പോസിറ്റീവ് ചാർജ്ജ് ചെയ്യുകയും നെഗറ്റീവ് ഇലക്‌ട്രോഡിലേക്ക് നീങ്ങുകയും ചെയ്യും.നേരെമറിച്ച്, അത് പോസിറ്റീവ് ധ്രുവത്തിലേക്ക് നീങ്ങുന്നു.ഒരു വൈദ്യുത മണ്ഡലത്തിൽ ചലിക്കുന്ന പ്രോട്ടീൻ തന്മാത്രകളുടെ വേഗത അവയുടെ ചാർജ്, തന്മാത്രകളുടെ ആകൃതി, വലിപ്പം എന്നിവയുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നതിനാൽ, ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് വഴി വ്യത്യസ്ത പ്രോട്ടീനുകളെ വേർതിരിക്കാനാകും.സെറത്തിൽ വിവിധതരം പ്രോട്ടീനുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, അവയ്‌ക്കെല്ലാം pH7.5 അല്ലെങ്കിൽ അതിൽ കുറവുള്ള ഐസോഇലക്‌ട്രിക് പോയിന്റുകൾ ഉണ്ട്.ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് പ്രവർത്തിപ്പിക്കുന്നതിനായി സെറം pH 8.6 ബഫറിൽ സ്ഥാപിക്കുമ്പോൾ, എല്ലാ സെറം പ്രോട്ടീനുകളും നെഗറ്റീവ് ചാർജ്ജ് ചെയ്യപ്പെടുകയും വൈദ്യുത മണ്ഡലത്തിലെ പോസിറ്റീവ് വശത്തേക്ക് നീങ്ങുകയും ചെയ്യും.വിവിധ സെറം പ്രോട്ടീനുകൾക്ക് ഒരേ pH-ൽ വ്യത്യസ്ത ചാർജുകൾ ഉള്ളതിനാൽ, തന്മാത്രാ കണികകൾ വലുപ്പത്തിൽ വ്യത്യസ്തമാണ്, അതിനാൽ മൈഗ്രേഷൻ വേഗത വ്യത്യസ്തമാണ്, അവ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് വഴി വേർതിരിക്കപ്പെടുന്നു.സെറം പ്രോട്ടീനുകളുടെ ഐസോ ഇലക്‌ട്രിക് പോയിന്റുകളും തന്മാത്രാ ഭാരവും ചുവടെയുള്ള പട്ടികയിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു:

സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് മെംബ്രൺ (abbr. CAM) ഉപയോഗിച്ച് രക്തത്തിലെ സെറമിലെ വ്യത്യസ്ത പ്രോട്ടീനുകളെ പിന്തുണാ മാധ്യമമായി വേർതിരിക്കുന്നതാണ് പരീക്ഷണം.CAM എന്നത് ഒരുതരം നുരയോടുകൂടിയ ലൂസാണ്eനല്ല യൂണിഫോം ഉള്ള ഫിലിം, കനം 0.1mm-1.5mm ആണ്, ഇതിന് ഒരു നിശ്ചിത ജലം ആഗിരണം ചെയ്യപ്പെടുന്നു.

CAM ഇലക്‌ട്രോഫോറെസിസിനുള്ള മെറ്റീരിയലുകളും ഉപകരണങ്ങളും റിയാക്ടറുകളും

സാമ്പിളുകൾ:ആരോഗ്യകരമായ മനുഷ്യ രക്ത സെറം

ഉപകരണം:വൈദ്യുതി വിതരണം DYY-6C, ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ടാങ്ക് DYCP-38C, ഉയർന്ന സാമ്പിൾ ലോഡിംഗ് WD-9404

പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങൾ

1) സെല്ലുലോസ് അസറ്റേറ്റ് മെംബ്രൺ 7X9cm

2) PH 8.6 ബാർബിറ്റോൾ ബഫർ ലായനി (അയോണിക് ശക്തി 0.05-0.09, ഇത് 0.06 ടൈം ആണ്.): 1,84 ഗ്രാം ഡൈതൈൽ ബാർബിറ്റ്യൂറിക് ആസിഡ് എടുക്കുക, തുടർന്ന് 1.03 ഗ്രാം ഡൈതൈൽ സോഡിയം പെന്റോബാർബിറ്റൽ എടുക്കുക, കുറച്ച് വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം ചേർത്ത് ചൂടാക്കി അലിയിക്കുക. 1000 മില്ലി വരെ;

3) കറ: പോൺസോ എസ് 0.2 ഗ്രാം, ട്രൈക്ലോറോസെറ്റിക് 3 ഗ്രാം, 100 മില്ലി വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം ചേർക്കുക;

4) TBS/T അല്ലെങ്കിൽ PBS/T: 45ml 95% എത്തനോൾ, 5ml ഗ്ലേഷ്യൽ അസറ്റിക് ആസിഡ്, 50ml വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം ചേർക്കുക;

5) ക്ലീനിംഗ് സൊല്യൂഷൻ: 70 മില്ലി അൺഹൈഡ്രസ് എത്തനോൾ, 30 മില്ലി ഗ്ലേഷ്യൽ അസറ്റിക് ആസിഡ്.

പരീക്ഷണ രീതിd

1) മെംബ്രൺ തയ്യാറാക്കുക: മെംബ്രൺ ബാർബിറ്റോൾ ബഫർ ലായനിയിൽ 30 മിനിറ്റ്-8 മണിക്കൂർ മുക്കി, പുറത്തെടുക്കുക, ആഗിരണം ചെയ്യാവുന്ന പേപ്പർ ഉപയോഗിച്ച് അധിക പരിഹാരം നീക്കം ചെയ്യുക.

2) സാമ്പിളുകൾ ലോഡുചെയ്യുന്നു: മെംബ്രണിന്റെ പരുക്കൻ വശവും മിനുസമാർന്ന വശവും വേർതിരിച്ച്, പരുക്കൻ ഭാഗത്ത് മുകളിലെ അറ്റത്തേക്ക് 1.5cm അകലത്തിൽ ഒരു രേഖ അടയാളപ്പെടുത്തുക.പരുക്കൻ ഭാഗത്ത് ഉയർന്ന സാമ്പിൾ ലോഡിംഗ് ടൂൾ ഉപയോഗിച്ച് സാമ്പിളുകൾ ലോഡ് ചെയ്യുക.ശ്രദ്ധിക്കുക: സാമ്പിളുകൾ മെംബ്രണിന്റെ പരുക്കൻ ഭാഗത്ത് ലോഡ് ചെയ്യണം.സെറം സാമ്പിളുകൾ പൂർണ്ണമായും മെംബ്രണിലേക്ക് തുളച്ചുകയറിയ ശേഷം, മെംബ്രൺ മറിച്ചിടുക, പരുക്കൻ വശം (സാമ്പിളുകൾക്കൊപ്പം) ടാങ്കിലേക്ക് മുഖം താഴ്ത്തുക, സാമ്പിളുകളുള്ള അവസാനം നെഗറ്റീവ് ഇലക്ട്രോഡിൽ സ്ഥാപിക്കുക.

3) ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ്: വൈദ്യുതി വിതരണം ഓണാക്കുക, 0.4～0.6m A/cm മെംബ്രൺ, പ്രവർത്തന സമയം 30-45 മിനിറ്റാണ്.ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് പ്രവർത്തിപ്പിച്ച ശേഷം, പവർ ഓഫ് ചെയ്യുക.

4) കറ വൃത്തിയാക്കുക: ടാങ്കിൽ നിന്ന് മെംബ്രൺ പുറത്തെടുത്ത് മുക്കുകit 5 മിനിറ്റ് ഡൈ ലായനിയിൽ വയ്ക്കുക, തുടർന്ന് പശ്ചാത്തല നിറം വ്യക്തമാകുന്നത് വരെ 3-4 തവണ ക്ലീനിംഗ് ലായനിയിൽ വൃത്തിയാക്കുക.സെറം പ്രോട്ടീനുകൾ ബാൻഡുകളിൽ കാണിക്കണം, സാധാരണയായി അഞ്ച് സോണുകൾ ഉണ്ട്, അടയാളപ്പെടുത്തിയ വരിയുടെ മുകൾഭാഗം, ആൽബുമിൻ, α1-ഗ്ലോലിൻ, α2-ഗ്ലോലിൻ, β-ഗ്ലോലിൻ, γ-ഗ്ലോലിൻ.

5) സംരക്ഷണം: ഉണങ്ങിയ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ഇടുകബാൻഡ്ക്ലീനിംഗ് ലായനിയിൽ 10-15 മിനിറ്റ്, എന്നിട്ട് അത് പുറത്തെടുത്ത് വൃത്തിയുള്ള ഗ്ലാസിൽ ഒട്ടിക്കുക, ഉണങ്ങിയ ശേഷം, അത് ഒരു സുതാര്യമായ ഫിലിം ആയി മാറും.ബാൻഡ്.

പരീക്ഷണംഫലമായി

സെറം സാമ്പിളുകളുടെ വേർതിരിക്കൽ പ്രഭാവം നല്ലതാണ്, കൂടാതെ ബാൻഡ് ടെയ്ലിംഗ് പ്രതിഭാസവുമില്ല.പരിശോധനാ നടപടിക്രമങ്ങളും പരീക്ഷണാത്മക രീതികളും കാരണം ഫലങ്ങളുടെ ആവർത്തനക്ഷമത വ്യത്യാസപ്പെടുന്നു, ആവർത്തനക്ഷമത ഉയർന്നതാണ്.

ഉപസംഹാരം

ദ്രുത ക്ലിനിക്കൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ഡിറ്റക്ഷൻ സിസ്റ്റം (ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ടാങ്ക്DYCP-38C,വൈദ്യുതി വിതരണംDYY-6C ഉം ഉയർന്ന സാമ്പിൾ ലോഡിംഗ് WD-9404) ഞങ്ങൾ നിർമ്മിച്ചത്കമ്പനി Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdപരീക്ഷണാത്മക ആവശ്യകതകൾ നിറവേറ്റുന്നു,ഒപ്പംഫലങ്ങൾ പുനരുൽപ്പാദിപ്പിക്കാവുന്നതും ലളിതവും വേഗതയേറിയതും അനുയോജ്യവുമാണ്പഠിപ്പിക്കുന്നുഗവേഷണം.

ബെയ്ജിംഗ് ലിയുയിബയോടെക്നോളജി കമ്പനി, ലിമിറ്റഡ് ലൈഫ് സയൻസ് വ്യവസായത്തിനായി ഇലക്‌ട്രോഫോറെസിസ് ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ നിർമ്മിക്കുന്നതിൽ പ്രത്യേകം ശ്രദ്ധിക്കുന്നു.ചൈനയിൽ 50 വർഷത്തിലേറെ ചരിത്രമുണ്ട്, കമ്പനിക്ക് ലോകമെമ്പാടും സുസ്ഥിരവും ഉയർന്ന നിലവാരമുള്ളതുമായ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ നൽകാൻ കഴിയും.വർഷങ്ങളുടെ വികസനത്തിലൂടെ, ഇത് നിങ്ങളുടെ തിരഞ്ഞെടുപ്പിന് യോഗ്യമാണ്!

ഞങ്ങൾ ഇപ്പോൾ പങ്കാളികളെ തിരയുകയാണ്, OEM ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ടാങ്കും വിതരണക്കാരും സ്വാഗതം ചെയ്യുന്നു.

ഞങ്ങളെക്കുറിച്ചുള്ള കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾക്ക്, ഇമെയിൽ വഴി ഞങ്ങളെ ബന്ധപ്പെടുക[ഇമെയിൽ പരിരക്ഷിതം]അഥവാ[ഇമെയിൽ പരിരക്ഷിതം].